تشخیص ویروس پسوروز مرکبات بوسیله روش مولکولی rt-pcr در مرکبات

پسوروز یک از بیماری های ویروسی مهم مرکبات در برخی از مناطق دنیا بوده و عامل آن،,(cpv) citrus psorosis virus یک ویروس چند قطعه ای با آر.ان.ای تک رشته ای است که موجب پوسته پوسته شدن تنه درختان مسن و بروز نقش میخی در برگ های جوان می شود. روش های سنتی تشخیص بیماری های پسوروز شامل مشاهده علائم در برگ ها و تنه و انجام آزمون های حفاظت تقاطعی و نیز نموده سازی درختان مظنون بر روی نهال های شاخص می باشد. در مواردی علیرغم وجود علائم بارز پوستی پسوروز، آلودگی درختان به پسوروز منفی بوده است. روش های مولکولی راه را در جهت شناسایی دقیق تر عوامل مولد بیماری های مختلف و نیز مقایسه جدایه ها با یکدیگر هموار ساخته است. در این تحقیق برای تشخیص ویروس پسوروز مرکبات از آزمون نسخه برداری معکوس واکنش زنجیره ای پلی مراز (rt-pcr)، و کاربرد آغازگرهای اختصاصی ویروس پسوروز مرکبات استفاده شد. بدین منظور، تعدادی از نهال های بذری لیموترش سالم ( (citrus aurantifolia8 تا 12 ماهه، با دو منبع آلوده به ویروس پسوروز (p1و ,(p4از دو درخت پرتقال آلوده در ساری پیوند، و در شرایط گلخانه oc)21-30( نگهداری شدند. در نهال های آلوده، خطوط نامنظم سبزردی و کوتاه و نقش میخی بر روی رگبرگ ها، و موازی با آن ها دیده شد. در این تحقیق سه روش استخراج آر.ان.ای امتحان شد. روشی که از بافر گوانیدین تیو سیانات همراه با فنول/کلروفرم برای استخراج آر.ان.ای کل از بافت برگ استفاده شده بود، مناسب تر از سایر روش ها بود و کیفیت اسیدنوکلئیک استخراجی بالاتر بود. از rt-pcrو با بکار گیری آغازگرهای خاص پروتئین پوششی برای تشخیص ویروس پسوروز استفاده شد. یک قطعه 300 نوکلئوتیدی در نمونه های آلوده و دارای علائم نقش میخی با بکارگیری آغازگرشماره 5 (cpv1,cpv2) قابل ردیابی بود. طول قطعه بدست آمده با قطعه ایکه از تکثیر جدایه های خارجی پسوروز گزارش گردیده است (600 نوکلئوتیدی) کوتاهتر بود و این میتواند نشانگر عدم شباهت کامل جدایه های کشورهای دیگر باشد. بکار گیری روش مناسب تر در استخراج آر.ان.ای از بافت های آلوده که در این بررسی با بکارگیری گوانیدین تیو سیانات حاصل شد برای حصول قطعه مورد انتظار، تأثیر قابل توجهی داشت.